| 1 主題內(nèi)容與適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用分光光度計(jì)測(cè)定各類動(dòng)物性食品中膽固醇的方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類動(dòng)物性食品中膽固醇的測(cè)定。
2 原理
當(dāng)固醇類化合物與酸作用時(shí)，可脫水并發(fā)生聚合反應(yīng)，產(chǎn)生顏色物質(zhì)。因此可先對(duì)食品樣品進(jìn)行提取和皂化，用硫酸鐵銨試劑作為顯色劑，測(cè)定食品中膽固醇的含量。
3 試劑
全部試劑除注明外均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水。
3.1 石油醚。
3.2 無(wú)水乙醇。
3.3 濃硫酸。
3.4 冰乙酸：優(yōu)級(jí)純。
3.5 磷酸。
3.6 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。
3.7 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液。
3.7.1 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1mg/mL)：精確稱取膽固醇100mg，溶于冰乙酸中，并定容至100mL。此液至少在2個(gè)月內(nèi)保持穩(wěn)定。
3.7.2 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)常備液(100μg/mL)：吸取膽固醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液10mL，用冰乙酸定容至100mL。此液用時(shí)臨時(shí)配制。
3.8 鐵礬顯色劑。
3.8.1 鐵礬儲(chǔ)備液：溶解4.463g硫酸鐵銨［FeNH4(SO4)2·H2O］于100mL85%磷酸中，貯于干燥器內(nèi)，此液在室溫中穩(wěn)定。
3.8.2 鐵礬顯色液：吸取鐵礬儲(chǔ)備液10mL，用濃硫酸定容至100mL。貯于干燥器內(nèi)，以防吸水。
3.9 50%氫氧化鉀溶液：稱取50g氫氧化鉀，用蒸餾水溶解，并稀釋至100mL。
3.10 5%氯化鈉溶液：稱取5g氯化鈉，用蒸餾水溶解，并稀釋至100mL。
3.11 鋼瓶氮?dú)猓杭兌?9.99%。
4 儀器和設(shè)備
4.1 實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。
4.2 721型分光光度計(jì)。
4.3 電熱恒溫水浴。
4.4 電動(dòng)振蕩器。
4.5 具玻塞試管：體積10mL、25mL。
5 操作步驟
5.1 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)線
吸取膽固醇標(biāo)準(zhǔn)常備液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0mL分別置于10mL試管內(nèi)，在各管內(nèi)加入冰乙酸使總體積皆達(dá)4mL。沿管壁加入2mL鐵礬顯色液，混勻，在15～90min內(nèi)，在560～575nm波長(zhǎng)下比色。以膽固醇標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5.2 樣品測(cè)定
5.2.1 食品脂肪的提取與測(cè)定
根據(jù)食品種類分別用索氏脂肪提取法、研磨浸提法和羅高氏法提取脂肪。并計(jì)算出每100g食品中的脂肪含量。
5.2.2 食品膽固醇的測(cè)定
將提取的油脂3～4滴(約含膽固醇300～500μg)，置于25mL試管內(nèi)，準(zhǔn)確記錄其重量。加入4mL無(wú)水乙醇，0.5mL 50%氫氧化鉀溶液，在65℃恒溫水浴中皂化1h。皂化時(shí)每隔20～30min振搖一次使皂化完全。皂化完畢，取出試管，冷卻。加入3mL 5%氯化鈉溶液，10mL石油醚，蓋緊玻塞，在電動(dòng)振蕩器上振搖2min，靜置分層(一般約需1h以上)。
取上層石油醚液2mL，置于10mL具玻塞試管內(nèi)，在65℃水浴中用氮?dú)獯蹈桑尤?mL冰乙酸，2mL鐵礬顯色液，混勻，放置15min后在560～575nm波長(zhǎng)下比色，測(cè)得吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的膽固醇含量。
6 結(jié)果計(jì)算
7 平均允許誤差
同一實(shí)驗(yàn)室同時(shí)或連續(xù)兩次測(cè)定結(jié)果之差不得超過(guò)平均值的10%。
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