|
中國調(diào)味品協(xié)會于今年召開了《醬油中乙酰丙酸測定方法》行業(yè)標準討論會及審定會。會后，中國調(diào)味品協(xié)會按照標準報送程序?qū)⒃撔袠I(yè)標準報送至中華人民共和國商務(wù)部。目前，該行業(yè)標準已經(jīng)進入審批階段�，F(xiàn)將該行業(yè)標準報批稿以附件形式在網(wǎng)上公示：
醬油中乙酰丙酸的測定方法
1范圍
本標準規(guī)定了用氣相色譜法測定醬油中乙酰丙酸的方法。
本標準適用于醬油中乙酰丙酸的測定。
本標準方法的檢出限： 0.010g/kg。
�。ㄒ唬﹥�(nèi)標法
2原理
樣品經(jīng)酸化后，用乙醚提取乙酰丙酸，以正庚酸作內(nèi)標物質(zhì)，用具有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行測定，以內(nèi)標法進行定量。
3試劑和溶液
除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑和蒸餾水或去離子水。
3.1無水硫酸鈉：650℃下灼燒4小時，貯于密閉容器中備用。
3.2無水乙醚。
3.3濃鹽酸。
3.4 飽和氯化鈉。
3.5標準品正庚酸：色譜純，純度≥99.5%。
3.6標準品乙酰丙酸：色譜純，純度＞98%。
3.7正庚酸標準溶液：稱取0.50g正庚酸標準品（精確至0.0001g）（3.5），用乙酸乙酯定容至100mL。此標準溶液的濃度為0.0050g/mL。
3.8乙酰丙酸標準溶液：稱取0.50g乙酰丙酸標準品（精確至0.0001g）（3.6），用乙酸乙酯定容至100mL。此標準溶液的濃度為0.0050g/mL。
3.9標準系列溶液：分別準確吸取乙酰丙酸標準溶液（3.8）0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0mL于6個10mL容量瓶中,各加入1.0mL正庚酸標準溶液（3.7）,用乙酸乙酯定容，即得標準系列溶液，相當于每毫升含25，50，250，500，750，1000µg 的乙酰丙酸。
4儀器和設(shè)備
實驗室常規(guī)儀器、設(shè)備及下列各項：
4.1 100 mL具塞試管。
4.2 氣相色譜儀：配有氫火焰離子化檢測器（FID）。
4.3色譜柱：石英彈性毛細管柱，柱長30m，內(nèi)徑0.25mm，涂膜厚度0.5μm；固定液：Carbwax20M�；蚺c此相當?shù)纳V柱。
4.4 250mL圓底燒瓶。
4.5 濃縮設(shè)備（水浴、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或氮吹儀）。
5分析步驟
5.1樣品提取
準確稱取5.0g試樣（精確至0.0001g）于100mL具塞試管（4.1）中，加入10mL飽和氯化鈉溶液、1.0mL正庚酸標準溶液（3.7）、濃鹽酸3.0mL（3.3），充分震搖1min后，加入50.0 mL無水乙醚，震搖萃取3-5min，靜置約10- 15 min。待分層后，吸取上層乙醚萃取液于250mL圓底燒瓶（4.4）中，再重復(fù)萃取二次，合并乙醚萃取液，用10mL飽和氯化鈉溶液洗滌兩次，棄去下層。乙醚層過過量無水硫酸鈉脫水，在45℃左右濃縮至近干，殘液用乙酸乙酯定容至10mL，即可上機。
5.2測定
5.2.1氣相色譜參考條件
色譜柱溫度：120℃，1min 230℃，4min；
進樣口溫度：270℃；
檢測器溫度：270℃；
進樣方式：分流進樣，分流比25:1；
進樣體積：1μL；
氫氣流速：30 mL/min；
空氣流速：300 mL/min；
尾吹氣：30 mL/min；
載氣：高純氮，純度大于99.999%，流速：1.0mL/min。
5.2.2定量
用進樣器分別吸取1μL的標準系列溶液（3.9），注入氣相色譜儀，在上述色譜條件（5.2.1）下測定乙酰丙酸與內(nèi)標物質(zhì)的響應(yīng)峰面積。以乙酰丙酸峰面積/內(nèi)標物質(zhì)峰面積為縱坐標，以乙酰丙酸濃度為橫坐標，繪制標準曲線或計算回歸方程。
用進樣器吸取1μL的試樣（5.1），注入氣相色譜儀，在上述色譜條件（5.2.1）下測定試樣。根據(jù)標樣保留時間，確定乙酰丙酸和內(nèi)標物質(zhì)的峰位置，并記錄乙酰丙酸峰面積和內(nèi)標物質(zhì)峰面積，計算樣品中乙酰丙酸含量。
在上述色譜條件（5.2.1）下，通常保留時間為：乙酰丙酸約為14.6min，內(nèi)標物質(zhì)約為9.7min。
標準系列溶液的氣相色譜圖如下：
5.3空白試驗
用5.0 mL蒸餾水代替試樣，按5.1-5.2的步驟做空白試驗。
5.4結(jié)果計算
樣品中乙酰丙酸的含量 ，按式（1）計算：
5.5 精密度
同一樣品，兩次平行測定結(jié)果之差，不得超過平均值的10%。
�。ǘ┩鈽朔�
6原理
樣品經(jīng)酸化后，用乙醚提取乙酰丙酸，用配有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，以外標法（標準曲線法）跟系列標準進行比較定量。
7試劑
如非特別說明，本標準方法所用的水為蒸餾水，所用試劑均為分析純。
7.1 無水乙醚：不含過氧化物。
7.2 無水硫酸鈉。650℃以下灼燒4小時，貯于密閉容器中備用。
7.3 乙酸乙酯：經(jīng)重蒸餾處理。
7.4 6N鹽酸溶液：量取50mL濃鹽酸，用水稀釋至100mL。
7.5 乙酰丙酸標準品：色譜純，純度≥99.5％。
7.6 乙酰丙酸標準貯備液：準確稱取乙酰丙酸標準品（7.5）0.50g（精確至0.0001g），置于100mL容量瓶中，室溫下用乙酸乙酯（7.3）溶解稀釋并定容至刻度。此標準溶液濃度相當于5.0mg/mL乙酰丙酸。
7.7 乙酰丙酸標準系列溶液：吸取適量的乙酰丙酸標準貯備液（7.6），以乙酸乙酯（7.3）稀釋成每毫升相當于25，50， 100，500，750，1000mg 的乙酰丙酸。
8儀器和設(shè)備
實驗室常規(guī)儀器、設(shè)備及以下各項:
8.1 氣相色譜儀：配備氫火焰離子化檢測器。
8.2色譜柱：J&W DB-FFAP 色譜柱（柱長30m，內(nèi)徑0.25mm，內(nèi)膜厚度0.25μm，固定液：TPA改性聚乙二醇）或與之相當?shù)纳V柱。
8.3濃縮設(shè)備（旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、恒溫水浴、真空泵）。
8.4 25mL具塞試管。
8.5 100mL 梨形濃縮瓶。
9分析步驟
9.1 樣品提取
室溫下準確吸取充分均勻的醬油樣品5.0g（精確至0.0001g）于25mL具塞試管中，加入6N鹽酸溶液（7.4）1mL，充分震搖均勻，往試管中加入25mL無水乙醚（7.1），充分震搖萃取1分鐘，靜置約10-15分鐘，待上層乙醚與下層樣品充分分層后，吸取上層乙醚提取液于100mL濃縮瓶中，之后重復(fù)進行上述的萃取操作兩次，每次加入無水乙醚的量均為20mL，三次的乙醚萃取液合并后經(jīng)無水硫酸鈉（7.2）進行吸水處理，于40℃下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，以乙酸乙酯（7.3）溶解殘留物并于室溫下定容至5mL，搖勻后靜置，待氣相色譜進樣檢測。
9.2 色譜參考條件
色譜溫度：60℃，1min 18℃/min 200℃，1min 10℃/min 230℃，12min
進樣口溫度：260℃；
檢測器溫度：280℃；
進樣方式 ：不分流進樣；
進樣體積 ：1μL；
氫氣流速 ：35mL/min；
空氣流速 ：200mL/min；
載氣 ：氮氣，純度大于99.999％，流速：2.2mL/min；
尾吹氣 ：氮氣，純度大于99.999％，流速：27.8mL/min。
9.3 測定
以乙酰丙酸標準系列溶液（7.7）分別進樣1mL于氣相色譜儀中，測得不同的標準濃度下乙酰丙酸的響應(yīng)峰面積，以乙酰丙酸的濃度為橫坐標，相應(yīng)的峰面積為縱坐標，作一標準曲線并計算其回歸方程。
在相同的色譜條件下以上述處理后的樣品溶液（9.1）進樣1mL。測得的峰面積與標準曲線比較定量。
在上述色譜條件（9.2）下，標準系列溶液的氣相色譜圖如下：
9.4 結(jié)果計算
樣品中乙酰丙酸的含量按式（2）進行計算。
9.5 精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10% 。
|